伞枝梨头霉PCR试剂盒是指将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增相结合的技术。利用逆转录酶将RNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。常见应用包括基因检测、转录物变异检测,以及克隆和测序用cDNA模板制备。
伞枝梨头霉PCR试剂盒的模板准备:
根据不同的样本类型,按照相应的样本用量。
·将样本加入到1.5ml离心管中,加入体积的SolutionA,涡旋震荡20s,并按照处理方法,室温静置3-5min,或95℃金属浴振荡孵育3-5min。
样本充分裂解后(95℃金属浴振荡孵育的样本需恢复室温),加入体积的SolutionB,并涡旋震荡30s,12000rpm离心2min,上清即为模板DNA。
处理后的样本如在2小时内进行下一步试验,请于4℃保存,如不能立即进行下一步试验,请于-20℃保存。
伞枝梨头霉PCR试剂盒的注意事项:
1.建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
2.试剂BufferAL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀,混匀后再使用。
3.电泳检测时,切勿使用含有SDS的LoadingBuffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
4.建议扩增片段长度1kb以内,以便扩增效率佳。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。