植物ELISA试剂盒的原理:
样品中的游离三聚氰胺与预包被在板子上的三聚氰胺蛋白偶联物竞争结合酶标记三聚氰胺抗体,通过洗涤洗掉未结合的酶标记三聚氰胺抗体,再通过酶的专一性显色剂显色根据显色的深浅来判断样品中三聚氰胺含量。根据竞争性原理,如果样品中的游离三聚氰胺量少,则酶标记的三聚氰胺抗体与包被在板子上的三聚氰胺偶联物结合的多,显色深,反之,则显色浅。检测时设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中三聚氰胺的含量。
植物ELISA试剂盒的实验操作步骤如下:
1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可在小试管中进行稀释。
2、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶标试剂,空白孔除外。
7、温育:操作同3。
8、洗涤:操作同5。
9、显色:每孔先加入显色剂,再加入显色剂,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
10、终止:每孔加终止液,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11。、测定:以空白空调零,依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行。