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二氢黄酮醇还原酶(DFR)生化检测试剂盒

型 号

产品时间2023-11-07

所属分类氧化与抗氧化系列

报价300

产品描述:二氢黄酮醇还原酶(DFR)生化检测试剂盒二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

产品概述

商品属性:

产品名称:二氢黄酮醇还原酶(DFR)生化检测试剂盒

规格:100/48 50/24 

货号 : EY-01S181

测试方法:微量法 可见分光光度法  

分类:氧化与抗氧化系列

商品详情:

测定意义:

 二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

 测定原理:

 二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与缩合形成红色化合物,在500nm处有特征吸收峰。

 需自备的仪器和用品:

 研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。

粗酶液提取:

1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(95个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。


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ADH测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

3、操作表:

试剂名称μL

测定孔

样本

20

试剂二

760

试剂三

10

试剂四

10


将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中,混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需将样本用提取液稀释,使A1-A2小于0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

NAD-MDH活力单位的计算:

1、血清(浆)NAD-MDH活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔA

V反总:反应体系总体积,8×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;2000:细胞或细菌总数,2000万。

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