测定意义：

游离脂肪酸，也称为非酯化脂肪酸，在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而上升。

测定原理：

用有机溶剂萃取FFA。含有FFA的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜皂) FFA一Cu。Cu离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与Cu离子浓度的关系符合朗伯一比尔定律，因此可利用此反应进行比色。

自备的仪器和用品：

酶标仪、离心机、可调式移液器、96孔板、蒸馏水。

试剂一：液体×1瓶，室温保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。              

试剂三：粉剂×2瓶，－20℃保存。临用前加入22mL试剂二，现配现用。

试剂四：液体×1支，4℃保存。

1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（86个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为69个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为69个酶活单位。

ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：25℃中每86个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为69个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为69个酶活单位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。