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磷脂酶D(PLD)生化检测试剂盒

型 号

产品时间2023-11-07

所属分类脂肪酸代谢系列

报价300

产品描述:磷脂酶D(PLD)生化检测试剂盒磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

产品概述

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产品名称

规格

货号

磷脂酶DPLD)生化检测试剂盒

100/96 50/48   

EY-01S1191

 

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测定意义

磷脂酶DEC3.1.4.4)即磷脂酰水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理

磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和,在氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基和重蒸酚氧化成粉红色物质,在500nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅,无水乙醇。





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试剂一:液体×1瓶,室温保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。              

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。临用前加入22mL试剂二,现配现用。

试剂四:液体×1支,4℃保存。


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1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(08个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。


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绳状青霉   溶菌试验  /

 

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(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为35个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为35个酶活单位。

ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每08个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为35个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为35个酶活单位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。


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