技术文章/ARTICLES

1．菌种准备

1) 发光细菌新鲜菌悬液的制备

(1) 斜面菌种培养。于测定前48h取保存菌种，于新鲜斜面上接出*代斜面，(20±0.5)℃培养24h立即转接第二代斜面，(20±0.5)℃培养12h，再接出第三代斜面，(20±0.5)℃培养12h后备用。每次接种量不超过1接种耳。

(2）摇瓶菌液培养。取第三代斜面菌种近1环，几接种于装有50mL培养液的250mL三角瓶内，(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培养 12-14h，备用。

(3) 将培养液稀释至每毫升108一944个细胞，初始发光度不低于800mV，置冰浴中备用。

2）菌液复苏

取冷藏的发光菌冻干粉，置冰浴中，加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液，充分摇匀，复苏2min，使其具有微微绿光，初始发光度不低于800mV。

2．样品采集与处理

1) 水样

(1) 从不同工业废水的各排放口，每4h采样一次，每次取样后于4℃保存，连续采集24h后，均匀混合后备用。

(2) 纳污水体取其入口、中心、出口三个断面混合水样备用。

(3）以同上方法采集清洁水，作空白对照。

浊度大的污水，需静置后取上清液。一般样品不需加任何处理。水样按3%比例投加NaCl，置冰箱备用。

2) 气体样品

以大气采样法采取一定体积的大气样品，通过气体吸收液（(5mL)中吸收，按3％比例投加NaCl，置冰箱备用，同法收集清洁空气作为对照组。

3) 固体样品

取固体废弃物，按《工业固体废弃物有害特性试验与监测分析方法》制备浸出液，取上清液，按3％比例投加NaCl，置冰箱备用。

3．实验浓度的选择

在预备实验的浓度范围内，按等对数间距或百分浓度取3-426个实验浓度，同时设空白对照和参比毒物系列浓度组。

4．发光细菌法生物毒性浏定

1) 工业废水或有毒物质的生物毒性测定

(1) 发光菌悬液初始发光度测定。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管内，加新鲜发光菌悬液或冻干粉复苏菌悬液10μL，若测量发光度在800mV以上，允许置冰浴中备用。

(2) 取已处理待测废水样品，按等对数间距或百分浓度编号，并注明采集点。

(3) 按表4-40-1依次加入稀释液，待测水样及参比毒物系列浓度溶液。

(4) 打开生物毒性测试仪电源，预热15min，调零点，备用。

(5) 每管加入菌悬液10μL，准确作用5 min或15min，依次测定其发光强度，记录毫伏数。

每个浓度设3管重复。

2) 工业废气（或有害气体）的生物毒性测定

(1) 气体直接通入法。用注射器直接注入气体于菌悬液中，经10-20min测定发光菌强度的变化。

(2) 气体吸收法。方法同工业废水测定法。

(3) 固体落法。挑选固态培养对数生长期的发光菌单菌落，连同培养基切下，置比色管内，测定初始发光强度，然后用注射器将待测气体注入菌苔表面，经10-20min后，测定发光度的变化。