传代培养操作步骤:
一、贴壁培养
细胞传代培养操作步骤如下:
(1)传代前在倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度,当细胞生长密度达到80%~90%时,即可进行传代。
(2)吸掉或倒掉培养瓶内的培养液。加入PBS清洗1~2次,左右轻轻摇晃后弃掉。
(3)根据培养瓶大小向瓶内加入适量含EDTA的,一般应覆盖整个培养瓶底。
(4)把培养瓶放入37℃ CO2培养箱进行消化,2~5min后拿出放在倒置显微镜下进行观察,当发现有70%~80%细胞收缩变圆、细胞间隙变大时,再轻轻拍打培养瓶使剩余细胞脱落,然后立即加入2倍量的培养液中止消化,使用吸头轻轻吹打,混合均匀,以防消化过度。
(5)吸出所有细胞悬液至离心管内,1000rpm/min离心3~5min。
(6)弃上清,加入适量培养液重悬细胞,轻轻吹打混匀,使细胞均匀分散。
(7)用吸头吸取适量细胞悬液,以适宜的密度接种于新的培养瓶中,补足培养液,摇匀,放置于37℃ CO2培养箱中进行培养。
(8)根据细胞生长状态确定换液或传代时间,甚至进行细胞冻存。
WERI-RB-1人视网膜神经胶质瘤细胞
细胞基本属性:
产品名称 | WERI-RB-1人视网膜神经胶质瘤细胞(STR鉴定正确) | 年龄性别 | 女性,1岁 |
种属 | 人 | 组织来源 | 眼睛,视网膜 |
细胞形态 | 圆形细胞聚集成葡萄状 | 生长特性 | 悬浮生长 |
细胞代数 | 10代以内 | 冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞详细介绍:
细胞别称 WERI-RB-1; WERI-Rb 1; WERI-Rb1; WERI-RB1; WERI Rb-1; WERI; Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1 背景介绍 WERI-Rb-I细胞株是1974年R.M. McFall 和 T.W. Sery建立的两株人眼癌细胞系中的一株。 细胞能在Difco Bacto-Agar中存活但不形成克隆。 扫描电镜显示在表面囊泡,板状伪足和微绒毛在数量上和频率上的改变。 细胞分化研究,的动物模型和生化评价都涉及这株细胞。 生物安全等级 1 细胞规格 1x106cells/T25或1mL冻存管 支原体检测 无 保藏机构 ATCC; HTB-169 DSMZ; ACC-90 ECACC; 06070602 培养基 IMDM+15%FBS+PS+1% 培养条件 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ 冻存条件无血清冻存液,液氮储 发货方式复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 供应限制仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
二、悬浮细胞
传代培养操作步骤如下:
一般实验室中悬浮细胞传代方法分为直接传代法和离心传代法(培养液中含有细胞碎片的情况下)。当在显微镜下观察到悬浮细胞已经长满至80%~90%(细胞悬液变黄)时,即可进行传代。
(1)严格进行无菌操作,所用一切试剂及耗材均应无菌,且须在无菌超净工作台中紫外照射30min以上,以免细胞发生污染。
(2)所用培养液必须适宜细胞生存和生长。来源于不同动物种类、组织类型的细胞,对培养液的要求不一样,必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。
(3)胎牛血清对于维持细胞生存,促进细胞生长起着关键作用。可根据文献或预实验选择合适的胎牛血清。一旦确定,就应保持用至实验完成。
(4)消化细胞时应避免消化时间过短导致消化不收集到的细胞数量少,或消化时间过长导致细胞成团块样絮状游离,这时的细胞已有损伤或死亡,影响细胞数量和实验进度。
(5)细胞离心的时候应避免离心力过小收集的细胞数量不够,或离心力过大对细胞产生损伤。离心后的细胞沉淀弃去上清后,应先弹散细胞沉淀,再加入培养液重悬,这样比直接吹打对细胞损伤小,可以提高细胞活率。
(6)吹打细胞时应尽量避免细胞的产生,以免损伤细胞,影响细胞状态(吹打过程中残留部分液体在吸头内可以减少气泡的产生)。
公司正在出售的产品:
NHDF adult Pellet 正常人皮肤成纤维细胞团块(捐献者) > 1 mio.cells CCCSCK 人异常原(APT)ELISA 试剂盒 IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的小鼠抗IgG 0.1ml
phospho-GABRG2(Ser366): 0酸化γ基γ2受体抗体 小鼠淋巴细胞白血病;L1210
293E(人胚肾细胞(EBNA1基因修饰)) 5×106cells/瓶×2 人异(iso-Hyd)ELISA 试剂盒 IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗IgG 0.1ml
GABRG3: G基受体γ3/GABAA Rγ3抗体 Spike Others SARS SARS Spike S1 Subunit 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人肺动脉成纤维细胞cDNAHPAF cDNA 人乙型脑炎病毒抗体(JE-Ab)ELISA试剂盒 IgG/APC APC标记的小鼠抗IgG 0.1ml
NEK7: 丝酸/苏酸蛋白激酶Nek7抗体 口腔角质细胞培养基OKM
F9小鼠畸胎瘤细胞 F9 mouse teratoma cells DMEM培养基+10%FBS 大鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒 CD20(Rat Troponin T) 小鼠CD20分子 96T
NPTX1: 神经细胞正五聚体1抗体 VLDLR Others Human 人 VLDLR / VLDL Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照)
T-108A胶原酶(含10mL酶解缓冲液)1mL 大鼠嗜铬蛋白B(CHGB)ELISA试剂盒 PDGF-BB 大鼠血小板衍生生长因子BB 96T
NNT: 酰胺核苷酸转氢酶抗体 大鼠肾小球系膜细胞;HBZY-1
WERI-RB-1人视网膜神经胶质瘤细胞B16F10细胞,小鼠黑色素瘤高转移细胞 FRhK-4(恒河猴胚肾细胞) SV40转染人成骨细胞;hFOB 1.19 人α半乳糖基抗体(Gal)ELISA 试剂盒 SFRP1(Secreted frizzled related protein 1) 分泌型卷曲相关蛋白1抗原 0.5mg
IKBKE: 核因子κB抑制蛋白E抗体 ICOS Others Human 人 ICOS / AILIM / CD278 人细胞裂解液 (阳性对照)
人胚肺成纤维细胞;MRC-5 人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA 试剂盒 SGLT1(sodium-glucose cotransporter1) -葡萄糖共转运载体1抗原 0.5mg
phospho-ITGB4(Tyr1494): 0酸化整合素β4抗体 人B淋巴细胞瘤细胞;RAMOS
SHG-44 (人胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 人αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA 试剂盒 Shadow/SPRN(Shadow of prion protein precursor) 新朊蛋白/朊蛋白相关蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白抗原 0.5mg
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